无缝克隆,让载体构建变得像搭积木一样简单
首先要强调的是,无缝克隆有两个主要的流派:Gibson assembly和Golden Gate assembly。由于Golden Gate assembly依赖于Type IIS限制性DNA内切酶(如BsaI,BbsI等),一旦载体不携带相应的识别序列,这种方法就走不通了。而假设通过PCR引入Type IIS内切酶识别序列,那便不是真正意义上的“无缝”了。因此本文所提的“无缝克隆”,特指Gibson assembly流,不涉及任何Golden Gate及其他流派。 目前,无缝克隆比较著名的商品化名字有NEB家的Gibson Assembly和NEBuilder HiFi DNA Assemb …